Kirby-Bauer tekniği, bakterilerin antimikrobiyal ajanlara duyarlılığını belirlemek için kullanılan standart bir mikrobiyolojik yöntemdir. Test organizması ile aşılanmış bir agar plakası üzerine yerleştirilen antibiyotik emdirilmiş disklerin etrafındaki bakteri üremesinin inhibisyon bölgesinin ölçülmesini içerir. Kirby-Bauer tekniğinin genel adımları şunlardır:
1. İnokulumun Hazırlanması :
- Test bakteri suşunun saf bir kültürü elde edilir ve logaritmik büyüme fazına (bulanıklık) ulaşmak için uygun bir et suyu kültür ortamında büyütülür.
- Bakteriyel süspansiyon, tutarlı bir inokulum yoğunluğunun sağlanması için tipik olarak 0,5 McFarland bulanıklık standardına eşdeğer olan belirli bir bulanıklığa göre standardize edilmiştir.
2. Agar Plakasının Aşılanması :
- Test için Mueller-Hinton agar veya başka bir uygun agar ortamı içeren steril agar plakaları kullanılır.
- Steril bir pamuklu çubuk kullanarak, standartlaştırılmış aşı, bakteri üremesinin birleşik bir çimini oluşturmak için agar plakasının yüzeyine eşit şekilde yayılır.
- Aşılanan plakanın fazla nemi emmesi için birkaç dakika kurumasına izin verilir.
3. Antibiyotik Disklerinin Uygulanması :
- Belirli konsantrasyonlarda antimikrobiyal ajanlar içeren steril antibiyotik diskler, steril forseps veya disk dağıtıcı kullanılarak eşit aralıklarla agar plakasının yüzeyine yerleştirilir.
- Disklere zarar vermeden agar yüzeyiyle iyi temas sağlamak için disklere hafifçe bastırılır.
4. Kuluçka :
- Antibiyotik diskli aşılanmış plaka, bakteriyel büyümeye ve antimikrobiyal ajanların difüzyonuna izin vermek için uygun bir sıcaklıkta (genellikle 35-37°C) belirli bir süre (tipik olarak 16-24 saat) inkübe edilir.
5. İnhibisyon Bölgelerinin Ölçümü :
- İnkübasyondan sonra plakalar, antibiyotik disklerin çevresinde inhibisyon bölgelerinin varlığı açısından incelenir.
- Bir cetvel veya dijital kumpas kullanılarak her inhibisyon bölgesinin çapı milimetre cinsinden ölçülür.
- Zon çapı, test organizmasının spesifik antibiyotiğe duyarlılığını gösterir.
6. Sonuçların Yorumlanması :
- Ölçülen bölge çapları, test organizmasının test edilen antimikrobiyal maddelere karşı duyarlılığını veya direncini belirlemek için Klinik ve Laboratuvar Standartları Enstitüsü (CLSI) tarafından sağlananlar gibi standartlaştırılmış tablolar veya kılavuzlarla karşılaştırılır.
- Organizmalar, inhibisyon bölgelerinin büyüklüğüne ve belirlenmiş yorumlama kriterlerine göre duyarlı, orta veya dirençli olarak sınıflandırılır.
7. Kalite Kontrolü :
- Kirby-Bauer tekniğinin doğruluğunu ve güvenilirliğini sağlamak için, bilinen duyarlılık modellerine sahip kalite kontrol suşları, yöntemin ve kullanılan reaktiflerin performansını izlemek üzere her test grubuna dahil edilir.
Kirby-Bauer antibiyotik duyarlılık testinden güvenilir ve klinik açıdan anlamlı bilgiler elde etmek için standartlaştırılmış prosedürleri takip etmek ve sonuçları belirlenmiş kılavuzlara göre yorumlamak önemlidir.