Macbeth oyununda Lady Macbeth, Kral Duncan'ın ölümünde çok önemli bir rol oynuyor. Macbeth'i kralı öldürmeye ikna eden odur ve onun bu işi planlamasına ve gerçekleştirmesine yardım eder.
Macbeth, kralı öldürme konusundaki şüphelerini ve korkularını dile getirdikten sonra, Lady Macbeth onu korkak olduğu için azarlar ve suçu işlemesi için onu utandırır. Duncan'ı öldürme fikrinin zaten aklına geldiğini ve yalnızca "zayıf doğası" nedeniyle tereddüt ettiğini belirtiyor. Ayrıca ona kral olma tutkusunu hatırlatır ve hedeflerine ulaşmak istiyorsa acımasız olması gerektiğini söyler.
Lady Macbeth'in kararlılığı ve manipülasyonu sonunda Macbeth'i planını kabul etmeye ikna eder. Nasıl ve ne zaman yapılması gerektiği de dahil olmak üzere cinayetin ayrıntılarını ortaya koyuyor. Ayrıca Macbeth'e kanlı hançerleri Duncan'ın cesedinin yanında bırakmasını söyler, böylece suç kralın muhafızlarına düşer.
Cinayet işlendikten sonra Lady Macbeth başlangıçta olayı örtbas edebileceklerinden emindir. Ancak çok geçmeden suçluluk ve delilik belirtileri göstermeye başlar. Ellerindeki kana takıntılı hale gelir ve uyuyamaz. Ayrıca kendisini cinayetle suçlayan Duncan'ın hayaletine dair vizyonlar görmeye başlar.
Lady Macbeth'in suçluluğu sonunda dayanamayacağı kadar ağırlaşır. Oyunun dördüncü perdesinde ölür ve ölümü Macbeth için bir dönüm noktasıdır. Daha da acımasız ve zalim bir hale gelir ve sonunda aklını kaybeder.
Lady Macbeth'in Kral Duncan'ın ölümündeki rolü önemlidir çünkü hırsın gücünü ve kişinin arzularının ahlaki ilkelerinin üstesinden gelmesine izin vermenin tehlikelerini vurgulamaktadır. Eninde sonunda kendi hırsı ve suçluluk duygusuyla mahvolmuş, karmaşık ve trajik bir karakterdir.